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清华大学药学技术中心活性筛选平台—基因文库简介(含list)
2025年05月06日    活性筛选平台     浏览:369 次

I. 人膜蛋白cDNA质粒库

  细胞膜蛋白(如GPCRs、离子通道、转运蛋白等)是一类重要的药物靶点,同时也是生物学中的重点研究对象。药学技术中心活性筛选平台的人膜蛋白cDNA质粒库,面向校内外开放使用,提供约3800个膜蛋白的cDNA重组真核表达质粒,可以辅助您获得膜蛋白cDNA或重组蛋白,实现在细胞中表达膜蛋白,继而进行药物发现和膜蛋白相关功能研究。

  •      膜蛋白基因为人源基因膜蛋白;

  •     基因数约3,800个基因;

  •     质粒为真核表达载体,含CMV真核强启动子;pENTER质粒图.png

  •     所有基因端融合表达 Flag & 6×His,便于检测蛋白表达;

  •     含嘌呤霉素Puromycin抗性,用于稳定细胞株筛选;

  •     含有卡那霉素Kanamycin抗性,用于重组菌筛选;

  •     含有Left & Right Arms 结构,Left & Right Arms 用于 AdEasy 系统的腺病毒载体构建;

  •     目的基因两端有酶切位点,可直接酶切连接构建含有目的基因的病毒载体;

  •     每个基因以甘油菌形式存储于96孔板中。


  •  人膜蛋白cDNA质粒库


  •  人膜蛋白cDNA质粒库pENTER载体序列信息和使用说明      

       pENTER空载序列.docx

  •  人膜蛋白cDNA质粒库使用申请表

       清华大学药学技术中心人膜蛋白cDNA文库使用申请表.xlsx


II. 小鼠全基因组AAV-gRNA质粒库

  腺相关病毒(AAV)载体具有感染谱广泛、长期稳定表达外源基因、可穿越血脑屏障、对人无致病性等优点,成为体内递送CRISPR-Cas的有力工具之一。药学技术中心活性筛选平台的小鼠全基因组AAV-gRNA质粒库,面向校内外开放使用,提供近13,000个小鼠基因的gRNA真核表达质粒,适合与spCas9 AAV病毒或spCas9转基因动物联合应用,可以辅助您实现体内基因敲除,进行基础生物学研究和基因治疗的相关探索。

  •    gRNA针对小鼠全基因组,基因数约12,850个基因;

  •     载体骨架为AAV,含AAV ITR,可直接进行AAV包装

  •     每个目的基因(每孔)均覆盖4-5条gRNA pool的设计,极大增加敲除效率

  •     U6启动子驱动gRNA

pAV-U6-gRNA-CAGmini-GFP质粒图.png

  •     CAGmini启动子驱动GFP,监测质粒转染效率;

  •    含嘌呤霉素Puromycin抗性,用于细胞株筛选;

  •    抗菌性为氨苄青霉素Ampicillin,100 μg/mL;

  •    U6启动子通用引物:GGACTATCATATGCTTACCG;

  •    每个基因以甘油菌形式存储于96孔板中。

      

  •  小鼠全基因组AAV-gRNA质粒文库List

       Mouse Genome AAV-gRNA Library List.xlsx

  •  小鼠AAV-gRNA质粒库使用申请表

       清华大学药学技术中心小鼠AAV-gRNA质粒库使用申请表.xlsx


III. 人全基因组siRNA文库

       siRNA是一种利用RNAi技术进行功能基因/靶点高通量筛选的有力工具,其应用包括筛选药物靶点、筛选给药后与药物作用关联的基因、筛选与特定细胞表型或疾病表型相关的功能基因、筛选与病原体扩散和宿主反应相关的基因等。药学技术中心活性筛选平台购置的Dharmacon ON-TARGET plus siRNA文库久负盛名,有众多文献报道。

  • 针对人全基因;

  • 涵盖近~20,000个人基因;

  • 每个基因提供4条不同的siRNA,等比例预混后阵列分布在384孔板底部,1个基因对应1个孔;

  • siRNA库提供384孔形式,各孔siRNA初浓度为0.5 μM;

  • 保证每个基因对应的4条siRNA中至少有3条在mRNA水平上有≥75%的沉默效率;

  • siRNA正义链带有化学修饰,可预防正义链与RISC相互作用,提高反义链的摄取;

  • siRNA反义链“seed region”部分带有化学修饰,减少脱靶率,增强siRNA的靶向特异性;

  • 只提供整库/子库(Drug TargetGPCR等子库)筛选。


  • siRNA库使用申请表

           清华大学药学技术中心siRNA库使用申请登记表

  • 人siRNA库List-Human Genome

           siRNA List-Human Genome  - 37 plates.xlsx

  • 人siRNA库List-Human Drug Targets

           siRNA List-Human Drug Targets - 16 plates.xlsx

  • 人siRNA库List-Human Ubiquitin Conjugation

           siRNA List-Human Ubiquitin Conjugation-3 plates.xlsx

  •      人siRNA库List-Human Protein Kinases

           siRNA List-Human Protein Kinases -3 plates.xlsx

  •      人siRNA库List-Human Proteases

           siRNA List-Human Proteases -2 plates.xlsx

  •      人siRNA库List-Human Ion Channels 

           siRNA List-Human Ion Channels -2 plates.xlsx

  •      人siRNA库List-Human GPCRs

           siRNA List-Human GPCR-2 plates.xlsx

  •     人siRNA库List-Human Phosphatases

           siRNA List-Human Phosphatases-1 plate.xlsx



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