药学技术中心活性筛选平台配置的Applied Biosystems™ QuantStudio 6 Pro拥有出色的实时定量PCR性能、直观易用的操作界面以及强大的数据处理和分析功能,可用于基因差异表达、基因拷贝数检测、蛋白热漂移等多个应用场景。
设备编号:A23000086
荧光热漂移技术(Thermal Shift Assay,TSA)或称差示扫描荧光法(Differential Scanning Fluorescence,DSF),也是一种高灵敏度、高效率的小分子或配体高通量筛选策略。其原理大致是:蛋白质通常以天然的折叠态存在,加热导致蛋白发生去折叠从而暴露出疏水基团;荧光染料(如赛默飞的SYPRO Orange)在升温过程中逐渐结合到蛋白质疏水基团上,使荧光强度上升;当温度达到某个点时(Tm),展开的蛋白质聚集阻止荧光染料的结合,染料重新回到水环境中淬灭。这样,随着时间进程荧光强度上升又下降,类似一条“熔解曲线”。如果在蛋白质中加入配体,配体与蛋白质的结合(一般使蛋白变得稳定)会阻碍蛋白质的热变性,造成熔解温度的漂移ΔTm(Tm值增高)。也有一些配体倾向与去折叠后的蛋白质结合(Tm值降低)。
TSA技术的优势在于:
利用qPCR设备可以轻松实现高通量(筛选平台配置的QuantStudio™ 6 Pro具有384和96孔板模块),实验流程简单;
单孔蛋白用量<1 ug,成本较低;
如果用Tm值和数学模型推导亲和力Kd值,其Kd动态范围或优于ITC,可从10 mM到1 pM。
如果您想进一步了解TSA技术的实验流程,如染料的使用、程序的设置、数据分析等细节;如果您对qPCR定量、数字PCR相关应用和上机操作感兴趣,欢迎报名本次平台与赛默飞世尔(中国)有限公司携手举办的技术讲座和线下上机培训。
培训日程:2024年4月11日
报名链接:
http://p1n0cyiehv64d6n2.mikecrm.com/fvZBe2S
欢迎报名!
联系电话:010-62795723