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药物代谢平台液质联用(LC-MS)测试送样指南及FAQ
2021年10月28日    药物代谢(PKPD)平台     浏览:2039 次

1.    药物代谢平台的液质联用仪有哪些种类?分别对应哪些测试需求?

药物代谢平台目前主要配置有液相色谱串联三重四极杆质谱3台(Agilent 6460AB Qtrap 4500/6500),液相色谱串联高分辨质谱3台(Waters Xevo G2 QtofWaters Synapt G2-Si QtofThremo QE plus)。三重四极杆质谱一般针对定量测试,测定单一或多种化合物在样品中的准确含量,常见应用包括血药浓度测定、内源性代谢物靶向代谢组学研究、中药化学成分定量分析等。高分辨质谱一般针对定性测试,测定复杂样品体系内的化合物精确分子量,并基于此预测化合物的分子式,根据质谱数据库检索结果预测该质谱信号可能化合物归属,给出可能结构。常见的应用包括非靶向代谢组学研究、中药复方的化学成分分析、药物代谢产物结构鉴定等。

仪器.png

2.    液相色谱串联质谱(LC-MS)能够分析哪些样品?

大部分的生物样品、食品、环境、材料样品经过合适的前处理方法后均可采用LC-MS方法进行定性定量分析,常见的样品包括血浆(血清)、细胞(内容物)、细胞器(线粒体、外泌体等)、动物组织(新鲜/冻存/匀浆)、植物种子、叶片(提取物)、药物制剂、中药材提取物、制剂、浸膏等。

3.    LC-MS对于样品有哪些要求?

用户应充分了解自己的样品种类,平台可提供通用前处理方法,并协助用户进行实际样品的摸索和前处理操作。若用户自行进行样品前处理,应保证样品为适合LC-MS分析的完全溶解的澄清溶液,样品体积应不低于50μL(生物大分子表征可低至10μL样品),且不含有无机杂质。常见的溶剂有乙腈、甲醇、异丙醇、水,样品的溶剂最好是色谱方法流动相的初始比例,常见的为不同比例的甲醇水溶液或乙腈水溶液。为最大限度保护LC-MS仪器,确保样品能够正常测试,并得到高质量的质谱图,前处理完成的样品中应不含有难挥发性盐(如磷酸盐,硼酸盐等),不含有表面活性剂(甘油、吐温、十二烷基硫酸钠等),不含有腐蚀性酸、碱。尽量避免使用三丁胺、三乙胺等抑制ESI电离的化合物。平台提供氮吹仪、低温高速离心机、低温旋转蒸发仪、组织研磨仪、高通量涡旋仪等前处理设备供在平台进行测试的用户开放使用。

4.    如何在药物代谢平台进行LC-MS预约?测试前需要进行哪些准备工作?

对于定性测试:

1)分子量测定类应用,用户需要提供待测物的分子式、分子量、预估浓度范围,对于非溶液状态样品,还应提供可供参考的溶解性信息。高分辨质谱测定小分子化合物分子量样品的浓度范围一般在100ng/mL10μg/mL之间,应提供至少10μL溶液状态样品或1mg非溶液状态样品以供称量和测试;2)对于抗体药物、核酸等生物大分子表征应用,用户应提供浓度至少500μg/mL的蛋白样品,溶剂尽量为水或碳酸氢铵体系,体积至少10μL。平台可以提供trypsin等常见蛋白酶,若有特殊要求,需提前进行沟通;3)对于代谢组学、中药复方分析等复杂体系表征应用,用户应明确样品种类、选择合适的前处理方法,若有特殊关注的化合物或代谢通路等要求,需提前进行沟通。

对于定量测试:

在准备测试前先与平台进行沟通(具体联系人及联系方式见文末),通过沟通,平台会明确测试需求,制定初步方案。对于平台已经在LC-MS上开发了定量分析方法的化合物,用户可以直接按照平台提供的前处理方法进行样品准备,并预约定量测试。对于平台之前未开发方法的化合物,需遵守以下步骤:

1)准备待测物的标准品或对照品,通过查阅文献获得目前已有的色谱质谱条件、前处理方法等信息;2)在线上或前往郑裕彤E206填写送样信息表(包括待测物的分子量、分子式、溶剂及课题组、邮箱信息等);3)明确待测样品的种类,并提供相应的空白样品,用户可自行进行样品前处理或委托平台辅助进行样品前处理;4)等待平台技术员进行个性化方法开发,一般从预约日期开始计算,大约1-2周内能够完成,确定方法后,平台会通知具体的送样时间和测试日期;5)按照已开发的前处理方法准确样品,进行测试;6)测试完成后平台提交测试报告,反馈结果。

5.    如何联系药物代谢平台?

平台地址:清华大学郑裕彤医学楼E206 & E225

办公室地址:清华大学郑裕彤医学楼E207 & E209

平台线上预约网址:http://yqgx.tsinghua.edu.cn/webSite/websiteAction.do?ms=goToLabIndex&sysid=52104896

联系人:唐老师,010-62795450 / 010-62788677tangyu@tsinghua.edu.cn

初次预约送样测试,请以电话或邮件形式与平台取得联系。平台目前能够进行的测试和采用的仪器平台可参考下图,未包含在图中的测试需求请在预约测试前与平台进行沟通。

6.    药物代谢平台目前能够进行哪些测试?

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